PacBio测序即单分子实时测序，其以SMRT Cell为载体进行测序反应。测序开始时，悬浮在溶液中的样品DNA的环状文库片段涌入SMRT Cell的纳米微流控芯片表面。这种芯片的表面上覆盖着几百万个纳米级直径的小孔，称为零模波导孔（ZMW）。样品流过SMRT测序芯片时，DNA环状文库被固定在ZMW孔的底部。样品DNA被ZMW捕获后，4种不同荧光标记的dNTP通过布朗运动随机进入检测区域并与库制备过程中附着在样品DNA上的DNA聚合酶结合，开始复制DNA分子。当聚合酶将新的核苷酸碱基合并到新复制的链中时，会释放出微小的光，并被检测器捕获。根据发射的光，测序系统可以确定哪种DNA碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鸟嘌呤）被合成了，从而得到DNA序列信息。
PacBio Revio
与传统的二代测序技术相比，三代PacBio测序技术具有超长读长、无需扩增、无GC偏好性、可以直接检测碱基修饰等优点，在科研与医学相关领域得到广泛应用。PacBio最新推出的Revio测序平台只有CCS(Circular Consensus Sequencing，环形一致性序列)测序模式，直接以BAM格式输出HiFi reads。
在CCS测序模式下，因酶读长（平均90-100 Kb）远大于插入片段长度(10-20 Kb)，测序时聚合酶会绕着DNA模板进行滚环测序，使得插入片段被多次测序。这样单次测序中造成的随机测序错误，可以通过算法进行自我纠错校正，最终得到高准确度的HiFi Reads。
5848vip威尼斯电子游戏PacBio Revio平台包cell测序，单个cell HiFi产出最高达到110.5 G，平均HiFi产出为98.5 G；平均读长超过16 kb，N50超过16.5 kb；平均质量值在Q30以上。菲沙Revio平台各产出指标均达到行业领先水平。具体数据见下表。
表1 菲沙Revio平台单个cell产出统计表
3个样本等量混合建库，混测1个Revio上机测序。混样原始产出91.21 G，各样本拆分结果接近30 G，数据拆分率为98.68%，各样本的数据拆分一致性好，且3个样品的读长与平均质量值与包cell测序类似。
表2 菲沙Revio平台混样产出统计表
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